1. Introduksjon
Kalium 4-metoksysalicylat (4MSK), med en struktur som ligner på salisylsyre, er en ny medisinsk blekeingrediens som brukes i kosmetikk for sin blekende effekt og er en effektiv ingrediens i kosmetikk. Den har evnen til å forbedre hudtonebalansen, lindre overdreven pigmentering, korrigere atypisk spredning av epidermis, fremme utskillelse av melanin og forhindre fregner og flekker.

2. Hovedfunksjoner
Pigmentering, fregner og mangel på klarhet er et problem for mange asiatiske kvinner og derfor er hudlysende produkter av stor interesse for asiatiske kvinner. Effekten av kalium 4-metoksysalicylat er studert av ledende kosmetikkfirmaer, og resultatene vises nedenfor.
2.1. Hemming av melanogenese
Musemelanomceller (B16) ble dyrket i tre dager i nærvær og fravær av 4MSK, og antall celler og mengden melanin produsert ved et gitt antall celler ble målt. Forholdet mellom antall celler og mengden melanin i nærvær av 4MSK og mengden melanin i fravær av 4MSK ble oppnådd og effekten av 4MSK på melanogenese ble analysert på denne måten.
Resultatene viser at antall celler og mengden melanin etter 3 dager med 4MSK-tilsetning er vist i figur 2. Det ble bekreftet at 4MSK hadde en konsentrasjonsavhengig hemmende effekt på melanogenese, og resultatene av Williams-testen ble funnet å være statistisk signifikant for 3 x 10-4 og 10-3 mol/L addisjonsklynger sammenlignet med fravær av 4MSK addisjon. Imidlertid ble det ikke funnet noen effekt på celleproliferasjon for noen av konsentrasjonene av 4MSK som ble testet.

2.2. Impedans av kuraminidaseaktivitet
For evaluering av tyrosinaseaktivitet i ikke-cellulære systemer var substratet L-DOPA og mengden av dopakromproduksjon som følge av metabolismen ble analysert ved en 475 nm absorbanstest.
Impedanshastigheten for tyrosinaseaktivitet av 4MSK ble bestemt ved å tilsette 4MSK-løsning og lysat til reaksjonssystemet ovenfor og la denne blandingen reagere i 90 sekunder ved romtemperatur, noe som ga et forhold mellom verdiene som ble testet når 4MSK-løsning ble tilsatt sammenlignet med lysatgruppe.

2.3. Hemming av UV-induserte effekter på keratinocyttdifferensiering
Umiddelbart etter bestråling av 3D-hudmodellen med UV-lys ble en 4MSK-løsning tilsatt overflaten av hudmodellen, inkubert i 30 minutter og deretter ble 4MSK fjernet og inkubert i 1 dag. 4MSK-løsningen ble erstattet av et lyseringsmedium for kontrollformål. Hudmodeller tatt etter inkubering ble farget med anti-tropin-antistoffer for immunhistokjemiske studier og øyeblikkelig RT-PCR (revers transkripsjon-polymerasekjedereaksjon) for kvantifisering av tropin-mRNA-ekspresjon.
Som et resultat av immunhistokjemiske studier med anti-trofoblast-antistoffer, var den tredimensjonale hudmodellen lik in vivo-testen, med tilstedeværelse av et trofoblastprotein, en markør for differensiering, i nærheten av det granulære laget. Etter én dag med inkubering av denne hudmodellen i UV-brønner, ble ekspresjonen av troponin redusert. Tilsetningen av 4MSK til hudmodellen umiddelbart etter UV-bestråling undertrykte signifikant den UV-induserte reduksjonen i troponinekspresjon.
Videre viste kvantitativ PCR-analyse av RNA ekstrahert fra samme hudmodell at reduksjonen i mRNA-ekspresjon av taurolithionein i den UV-bestrålte gruppen ble undertrykt i den 4MSK-tilsatte gruppen. Resultatene bekreftet av immunhistokjemiske studier, dvs. reduksjon i troponinekspresjon på proteinnivå og undertrykkelse av reduksjon i 4MSK-ekspresjon, ble også bekreftet på mRNA-nivå.

2.4 Menneskelig pigmentforsvarseffekt
Tolv friske voksne mannlige frivillige ble eksponert for UVA- og UVB-bølgelengder på 4 steder på magen i 3 dager ved bruk av en kunstig UV-lyskilde tilsvarende lMED (minimal erytemdose) en gang daglig for hvert testperson. Fire kremer, 1 prosent, 3 prosent, 5 prosent 4MSK og en basekrem ble brukt som testprøver og påført 3 ganger daglig i 7 dager fra starten av UV-eksponering. For å evaluere graden av hyperpigmentering, ble hudtonen før og etter påføring målt to ganger med en fargetester og gjennomsnittsberegnet for å oppnå mengden endring før og etter eksponering, sammenlignet områdene der de forskjellige konsentrasjonene av 4MSK-kremer ble påført med områdene der basekremene ble påført.
Alle 12 mannlige forsøkspersoner ble brukt som forsøkspersoner. Gjennomsnittsalderen til forsøkspersonene var 38,4 år. L*-verdiene for hvert påføringssted før påføring av testartikkelen er vist i tabell-la. L*-verdiene ble analysert på hvert teststed før testartikkelen ble påført og bekreftet at det ikke var noen forskjell i hudtone mellom stedene før testen ble startet.
ΔL-verdiene for hvert teststed før testartikkelen ble påført og 7 dager etter påføring er vist i figuren nedenfor. ΔL på påføringsstedet med 1 prosent 4MSK krem var statistisk signifikant mindre enn ΔL på påføringsstedet med basekremen. Videre ble ΔL gradvis mindre med økende 4MSK-innhold, og konkluderte dermed med at 4MSK har en doseavhengig antipigmenteringseffekt. I tillegg ble det ikke observert hudavvik som hevelse, rødhet eller kløende kreft gjennom hele testperioden.

2.5. Forbedre ubalansen i keratinocyttproliferasjon og differensiering og fremme jevn frigjøring av melanin
Studier på melanocytter har vist signifikant hemming av melanogenese ved en konsentrasjon på 3 x 10-4 mol/L, med fullt potensial sammenlignet med eksisterende blekeaktive ingredienser. Studier av virkningsmekanismen ved hemming av melaninproduksjon, og om enzymet kuraminidaseaktivitet, som er nødvendig for melaninproduksjon, er hindret, har vist at 4MSK ikke bare hemmer melaninproduksjonen, men også har den effekten å hindre kuraminidaseaktivitet.
Det er kjent at hovedårsaken til pigmentering er UV-lys, som forårsaker en forbigående abnormitet i uttrykket av differensieringsmarkører i keratin-dannende celler. Basert på funnene våre om at ubalansen til differensieringsmarkøren er kronisk selv uten UV-bestråling på stedet for pigmentering, utførte vi en studie på normaliseringen av differensieringsmarkøren med 4MSK. Ved å bruke en tredimensjonal hudmodell har vi vist at 4MSK har en defensiv effekt mot ubalansert uttrykk av tropomyosin, en markør for keratinocyttdifferensiering, både på mRNA- og proteinnivå.

For det andre har in vivo-tester bekreftet at testproduktet som inneholder 15 prosent 4MSK har en konsentrasjonsavhengig forsvarseffekt mot UV-pigmentering. Ingen hudabnormaliteter ble observert i løpet av hele testperioden på grunn av bruken av testproduktet som inneholder 4MSK, noe som gjør 4MSK trygt og effektivt som en kosmetisk ingrediens.
In vitro-studier har bekreftet den direkte hemmende effekten av 4MSK på melanogenese og dens effekt på spredning og differensiering av keratin-dannende celler. Begge disse handlingene har en defensiv effekt på produksjon og frigjøring av melanin, som forårsaker overflødige melaninavleiringer i huden. In vivo tester har vist at 4MSK er et utmerket forsvar mot UV-pigmentering og det antas derfor at 4MSK også er effektivt mot pigmentering, fregner og matthet i form av overflødig hudmelanin.

3. Søknader

Kalium 4-metoksysalisylat brukes hovedsakelig i kosmetiske produkter.

4. Flytskjema

2,4-Dihydroksybenzosyre → tilsett natriumhydroksid alkalisk vandig løsning → oppløs → avkjøl → → juster PH → bunnfall → sentrifuge → skyll → tørr → rå 4-metoksysalisylsyre → varme → rør → ekstraktfilter → tørr → ren 4-metoksysalisylsyre → juster PH → rør 3 → gjenvinn løsemiddel → kjøl ned krystallisering → ekstraktfilter → rå 4-metoksysalisylsyre kalium → oppløs råolje → avfarge → ekstraktfilter → kjøl ned krystallisering → vakuum tørr → ren 4-metoksysalisylsyre kalium

5. Kvalitetsstandard

I følge Enterprise Standard

Varer	Spesifikasjoner	Resultater
Utseende	Hvitt til off-white pulver	hvitt pulver
Identifikasjon	HPLC, NMR, LC-MS	Samsvarer med standard
Tungmetaller	Mindre enn eller lik 20 ppm	<20ppm
Som	Mindre enn eller lik 2 ppm	<2ppm
Tap ved tørking	Mindre enn eller lik 0,5 prosent	0.29 prosent
Enkel urenhet	Mindre enn eller lik 1,0 prosent	Overholder
Assay (HPLC)	Større enn eller lik 98,0 prosent	98,56 prosent